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微生物檢驗(yàn)注意事項(xiàng)(菌落總數(shù)、大腸菌群、培養(yǎng)基制備、無(wú)菌操作等)

來(lái)源: 發(fā)布時(shí)間:2021-01-09

一、微生物實(shí)驗(yàn)室注意事項(xiàng)

1、工作室要矮小平整、光滑、無(wú)凹凸不平或棱角、四壁及屋頂用不透水之材質(zhì),便于擦洗及殺菌。

2、室內(nèi)采光面積應(yīng)大,從室外應(yīng)能看到室內(nèi)的情況。

3、為保證無(wú)菌室的潔凈,無(wú)菌室周圍需設(shè)緩沖走廊,走廊旁再設(shè)緩沖間,其面積可小于無(wú)菌室。

4、無(wú)菌室、緩沖走廊及緩沖間均設(shè)有日光燈及紫外燈,殺菌紫外燈離工作臺(tái)以一米為宜,其電源開(kāi)關(guān)應(yīng)設(shè)在室外。

5、無(wú)菌室與緩沖間進(jìn)出口應(yīng)設(shè)推拉門,門與窗平齊,門縫要封緊,兩門要錯(cuò)開(kāi),以免空氣對(duì)流造成污染。

二、使用無(wú)菌室注意事項(xiàng)

1、無(wú)菌室要保持清潔整齊,室內(nèi)僅存放必要的檢驗(yàn)用品,如:酒精燈、酒精棉、火柴、鑷子、接種針、接種環(huán)、記號(hào)鉛等。

2、室內(nèi)檢驗(yàn)用具及桌凳應(yīng)保持固定位置,不隨便移動(dòng)。

3、每2周用2%消毒液(二氧化氯等)水溶液擦拭工作臺(tái)、門、窗、桌凳及地面,然后用二氧化氯溶液噴霧消毒空氣或過(guò)氧乙酸熏蒸,紫外燈殺菌。

4、定期檢查室內(nèi)空氣無(wú)菌狀態(tài),進(jìn)行細(xì)菌和霉菌的檢查。

5、無(wú)菌室殺菌前應(yīng)將所有物品置于操作之部位,然后打開(kāi)紫外燈殺菌半小時(shí),時(shí)間一到,關(guān)閉紫外燈待用。

6、操作應(yīng)嚴(yán)格按照無(wú)菌操作規(guī)定進(jìn)行,操作少說(shuō)話,不喧嘩,以保持環(huán)境的無(wú)菌狀態(tài)。

三、配制培養(yǎng)基注意事項(xiàng)

1、滅菌時(shí)嚴(yán)格按照規(guī)定加熱、加壓,切忌時(shí)間過(guò)長(zhǎng)壓力過(guò)高,否則會(huì)造成營(yíng)養(yǎng)成分的破壞。

2、切忌使用銅鍋、鐵鍋配制培養(yǎng)基。

3、培養(yǎng)基不能二次高壓滅菌。

4、劃線用培養(yǎng)基可放入冰箱或培養(yǎng)箱除去水分。 

四、無(wú)菌操作注意事項(xiàng)

1、進(jìn)入無(wú)菌室之前先進(jìn)行空氣消毒,工作人員進(jìn)入無(wú)菌室以前,必須于緩沖間更換消毒過(guò)的工作服、工作帽及工作鞋。

2、動(dòng)作要輕,盡量減少走動(dòng),以免攪動(dòng)空氣。

3、操作要靠近酒精燈火焰區(qū),使用吸管要用吸球。

4、接種環(huán)/接種針用前用后進(jìn)行火焰滅菌。

5、工作結(jié)束作好終末消毒,所有培養(yǎng)物均應(yīng)高壓滅菌后再扔掉,以免污染環(huán)境。

 

五、菌落總數(shù)測(cè)定注意事項(xiàng)

1、選取樣品要有代表性,如為固體樣品要多采幾個(gè)部位,液體檢樣要混勻。

2、每次做樣從開(kāi)始到結(jié)束都要進(jìn)行超凈臺(tái)空氣凈度的監(jiān)測(cè),同時(shí)對(duì)所有滅菌物品做空白對(duì)照。

3、為減少稀釋倍數(shù)的誤差,在做連續(xù)遞增稀釋時(shí),每一稀釋液應(yīng)充分振搖使其均勻,同時(shí)每一稀釋度換一支吸管。

4、在進(jìn)行連續(xù)稀釋時(shí),應(yīng)將吸管內(nèi)液體沿壁流入,勿使吸管尖端觸及稀釋液。

5、傾倒?fàn)I養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基平板時(shí),溫度要在46±1℃之間,數(shù)量要在15ml左右為宜,不要太多太少。

6、培養(yǎng)物48h培養(yǎng)后培養(yǎng)基失重不超過(guò)15%,培養(yǎng)箱內(nèi)要放水。

7、檢樣加入平皿后應(yīng)立即傾注培養(yǎng)基并旋轉(zhuǎn)混勻,一般從稀釋到傾注不超過(guò)20分鐘。

8、平皿內(nèi)如有鏈狀菌落生長(zhǎng)時(shí):菌落之間無(wú)明顯界限且僅有一條鏈可視為一個(gè)菌落,如為不同來(lái)源的幾條鏈則將每條鏈各做一個(gè)菌落記。

9、做菌落記數(shù)時(shí)平板里所有的菌落都要記數(shù)。

 

六、大腸菌群注意事項(xiàng)

1、對(duì)乳糖膽鹽管產(chǎn)氣的觀察只要有氣泡往上冒就算產(chǎn)氣。

2、在伊紅美蘭瓊脂平板上挑取菌落時(shí)一定要選典型菌落。

 

七、霉菌、酵母菌檢驗(yàn)注意事項(xiàng)

1、稀釋樣品時(shí)用無(wú)菌水。

2、3天觀察時(shí)把所有的酵母菌做標(biāo)記。

3、如果有霉菌被培養(yǎng)出,請(qǐng)不要把皿蓋隨便打開(kāi),待培養(yǎng)物高壓滅菌后再清洗。

 

八、壞包分析注意事項(xiàng)

1、對(duì)已開(kāi)包的酸包脹包要馬上轉(zhuǎn)移到無(wú)菌瓶中,已防二次污染。

2、根據(jù)壞包的不同表現(xiàn)狀態(tài)適當(dāng)?shù)倪x擇培養(yǎng)項(xiàng)目。

3、做微生物培養(yǎng)的同時(shí)測(cè)定感官、理化指標(biāo),注意其有何變化。

 

九、商業(yè)無(wú)菌注意事項(xiàng)

1、要求有厭氧培養(yǎng)的一定要在厭氧環(huán)境下培養(yǎng)。

2、取樣測(cè)pH值,要與同批正常樣相比,看是否有顯著差異。

3、對(duì)pH 值有可疑的樣品都要做涂片染色鏡檢,與同批正常樣相比,看是否有明顯的微生物增殖現(xiàn)象。

4、保溫期間出現(xiàn)的脹包,漏包、或開(kāi)包發(fā)現(xiàn)PH、感官異常、變質(zhì),進(jìn)一步鏡檢發(fā)現(xiàn)有異常數(shù)量細(xì)菌的樣品均應(yīng)進(jìn)行劃線培養(yǎng)。

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